支氣管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）是研究肺部疾病的重要研究對象。作為非常見ELISA樣本類型之一，該如何處理該樣本呢？
收集得灌洗液樣本后，4 °C下以 800-1000 x g 轉(zhuǎn)速離心10 min，其中，樣本處理所得上清液供作生物化學(xué)和免疫學(xué)檢測，沉淀物作細胞學(xué)檢查。將上清液分離并作分裝，即可在后續(xù)的實驗中使用。
本篇樣本處理方法旨在作為一般參考，具體方案因樣本類型而異，需要您根據(jù)參考文獻并自行驗證決定，從而選擇更適合自己樣本的處理方案。
以下提供部分樣本收集與處理案例：
小鼠支氣管肺泡灌洗液制備（來源：Bio-protocol）
該Protocol描述了小鼠中基本的支氣管肺泡灌洗（BAL）程序?？梢酝ㄟ^Hema3染色，免疫染色，熒光激活細胞分選（FACS），聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR），二辛可酸（BCA）法蛋白定量，酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），luminex檢測等來分析從BAL獲得的細胞和液體。
1. 在二氧化碳箱中通入CO2處死小鼠。
2. 將實驗鼠移到生物安全柜。
3. 用70％乙醇浸濕小鼠。
4. 將小鼠正面朝上放在泡沫塑料板上，用針或膠帶固定手腳（圖 1A）。
5. 用剪刀從腹部至頸部切開皮膚，用鑷子撕開皮膚，露出胸腔和頸部（圖 1A）。
6. 輕輕去除頸部肌肉，露出氣管（圖 1B）。
7. 用鑷子將一根約10 cm長的尼龍繩放在氣管下方（圖 1C）。
8. 小心剪開肋骨，露出心臟和肺（圖 1D）。注意：不要剪斷氣管和肺！
9. 將留置導(dǎo)管插入氣管，用尼龍繩將導(dǎo)管和氣管鏈接牢固（圖 1E-1G）。
10. 在 1 毫升注射器中注入 0.8 毫升 PBS，并將其置于導(dǎo)管末端（圖 1H）。
圖 1
11. 將PBS緩慢注入并吸出，重復(fù)4次，將注射器從導(dǎo)管上拔出，將回收的灌洗液保存在1.5 ml的 Eppendorf（EP）試管中并置于冰上。
12. 重復(fù)步驟10-11三次。
13. 根據(jù)1.5 ml EP 管上的刻度記錄BALF容量。
14. 在4 °C下以 800 x g 轉(zhuǎn)速離心10 min。
15. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的5 ml管中，加入蛋白酶抑制劑混合物至終濃度為1mM和PMSF至終濃度為1mM，并充分混合。如果不立即使用，凍存于-80°C。此時上清液中的細胞因子/趨化因子和其他成分的蛋白質(zhì)可通過BCA法、ELISA法、熒光檢測法等進行樣本分析。
參考文獻
Sun, F., Xiao, G. and Qu, Z. (2017). Murine Bronchoalveolar Lavage. Bio-protocol 7(10): e2287. DOI: 10.21769/BioProtoc.2287.
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