組織樣本處理方法因樣本類型而異。
切割樣本后，稱取重量。使用 PBS 清洗除去多余血液后，加入含有蛋白酶抑制劑的 PBS或裂解緩沖液，通過手工勻漿、機械勻漿或超聲破碎的方法將標本勻漿充分。離心去除組織碎片，仔細收集上清并分裝，冷凍備用，避免反復凍融。 組織勻漿液在用于ELISA檢測前需定量總蛋白。
本篇樣本處理方法旨在作為一般參考，具體方案因樣本類型而異，需要您根據(jù)參考文獻并自行驗證決定，從而選擇更適合自己樣本的處理方案。
以下提供部分樣本處理案例：
小鼠腦組織勻漿制備（來源：Bio-protocol）
圖 1
1. 灌注后，將小鼠處死，分離頭部，用鑷子剝離頭骨。
2. 將大腦切片（圖 1A-C）。
3. 將腦組織收集到裝有200 μl裂解緩沖液的取樣管中（圖 1D）。
裂解緩沖液配方（原作者提供配方如下，僅供參考） |
20 mM Tris/HCl (pH 7.4) Dissolve Tris (hydroxymethyl) aminomethane in distilled water and regulate pH by HCl 150 mM NaCl 1% (v/v) NP-40 0.5% (v/v) deoxycholic acid 0.1% (w/v) SDS 0.5% (w/v) EDTA 2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride 10 μg/ml aprotinin |
4. 通過超聲破碎儀Digital Sonifier?, Branson（model: 250D），設置20 kHz, 200 W（原作者提供）將腦組織超聲破碎。
5. 將所得裂解物在4℃下15,000×g離心10 min。
6. 使用取樣管收集上清液（圖1G）。
參考文獻
Michinaga, S. and Koyama, Y. (2015). ELISA Detection of Endogenous Serum Albumin in the Mouse Brain: A Measure of Extravasation Following Brain Injury. Bio-protocol 5(9): e1469. DOI: 10.21769/BioProtoc.1469.
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