走近指標(biāo)：TGF-β1
（圖1：TGF-β1結(jié)構(gòu)圖）
TGF-β1(Transforming growth factor-β1)是一類(lèi)在結(jié)構(gòu)和功能上具有某些特點(diǎn)的多肽因子家族。該家族包括同二聚體從TGF-β1至TGF-β5，異二聚體有TGF-β1、2。TGF-β1以非活性狀態(tài)存在，激活時(shí)是TGF-β1活性部分的釋放。在體外，TGF-β1的活化是對(duì)其酸化。TGF-β1具有激活和抑制雙重功能。許多TGF-β1的受體調(diào)節(jié)其生物活性，有受體I(53-65KD)，受體II(83-110KD)，受體III(250-310KD),受體IV(60KD),受體V(400KD)。TGF-β1是一種多功能細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)蛋白，TGF-β最初由血小板中分離出來(lái)，后發(fā)現(xiàn)在許多組織中均可表達(dá)。TGF-β是多肽家族成員，包括5種形式(1～5)。TGF-β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)和激動(dòng)劑A(activin A)有相近的分子結(jié)構(gòu)，因此它們有可能由同一原始基因演變而來(lái)。TGF-β刺激未轉(zhuǎn)化成骨細(xì)胞(untransformed osteoblastic cell)DNA的合成和細(xì)胞的增殖，其對(duì)成骨細(xì)胞分化功能的作用也因細(xì)胞處于不同的分化階段而不同。有研究表明，TGF-β對(duì)骨吸收有雙重作用——既抑制又促進(jìn)。它參與了胚胎的發(fā)育、損傷組織的修復(fù)、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等生理病理過(guò)程，是目前眾多學(xué)科的研究熱點(diǎn)。
為什么檢測(cè)TGF-β需要活化樣本？
（圖2：活性TGF-βs的合成與釋放過(guò)程1）
TGF-β最初以非活性前體形式(latent TGF-β，L-TGF-β)被合成和分泌，包含信號(hào)肽、前結(jié)構(gòu)域和成熟多肽。信號(hào)肽被去除后，前體分子通過(guò)堿性殘基的蛋白水解裂解進(jìn)一步加工，產(chǎn)生成熟的同型或異型二聚體配體。
潛伏的TGF-β復(fù)合物可以通過(guò)與潛伏TGF-β結(jié)合蛋白(LTBP)形成二硫鍵，結(jié)合成一個(gè)潛伏復(fù)合物(LLC)，這使得潛伏的TGF-β能夠穩(wěn)定儲(chǔ)存而不是進(jìn)一步激活。此外，潛伏的TGF-β還可以與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)或巨噬細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白A為主的重復(fù)序列蛋白(GARP)和LRRC33結(jié)合。在LAP上的Arg-Gly-Asp(RGD)序列與整合素αvβ6或αvβ8相互作用后，TGF-β才能從其潛伏復(fù)合物中變構(gòu)釋放。只有從潛伏復(fù)合物中釋放出來(lái)，TGF-β才能具有活性并激活其受體。
在體外，非活性狀態(tài)的TGF-β通過(guò)酸處理可被活化。
使用欣博盛生物TGF-β1 ELISA試劑盒時(shí)，如何預(yù)處理樣本？
欣博盛生物TGF-β1 ELISA試劑盒，相比其他指標(biāo)試劑盒額外提供專(zhuān)門(mén)用于活化樣本的激活液（A液）與終止液（B液）兩種組分，針對(duì)不同的標(biāo)本提供參考活化方式如下：
血清或血漿標(biāo)本激活方法:
a.在225ul標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液中，加入5μl血清或血漿標(biāo)本。
b.加10ul A液（激活液），蓋緊，上下混勻。2－8℃放置60±2分鐘。
c.加10ul B液（終止液），蓋緊，上下混勻。（總體積250ul即50倍稀釋?zhuān)?/p>
d.即用，或置-20/-70℃可保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
（注意：不同的標(biāo)本TGF-β1的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度，不同濃度稀釋僅需要改變稀釋液體積）
細(xì)胞培養(yǎng)上清標(biāo)本激活方法:
a.在80ul標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液中，加入100μl標(biāo)本。
b.加10ul A液（激活液），蓋緊，上下混勻。2－8℃放置60±2分鐘.
c.加10ul B液（終止液）， 蓋緊，上下混勻。（總體積200ul即2倍稀釋?zhuān)?/p>
d.即用，或置-20/-70℃可保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。.
（注意：不同的標(biāo)本TGF-β1的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度，不同濃度稀釋僅需要改變稀釋液體積）
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 靈敏度 | 檢測(cè)范圍 |
QuantiCyto? Human Latent TGF-β1 ELISA kit（人潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1） | 0.78pM | 1.56-100pM | |
QuantiCyto? Human TGF-β2 ELISA kit（人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2） | 15.6pg/ml | 31.25-2000pg/ml | |
QuantiCyto? Human TGF-β1 ELISA kit（人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1） | 15.6pg/ml | 31.25-2000pg/ml | |
QuantiCyto? Mouse TGF-β1 ELISA kit（小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1） | 15.6pg/ml | 31.25-2000pg/ml | |
15.6pg/ml | 31.25-2000pg/ml | ||
QuantiCyto? Porcine TGF-β1 ELISA kit（豬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1） | 15.6pg/ml | 31.25-2000pg/ml |
參考文獻(xiàn)
1. Zhao H, Wei J, Sun J. Roles of TGF-β signaling pathway in tumor microenvirionment and cancer therapy[J]. International Immunopharmacology, 2020, 89: 107101.
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