ELISA標準曲線是結(jié)果計算的標尺，因此標準品的把控ELISA實驗成功與否的關(guān)鍵點。怎樣正確溶解、稀釋標準品呢？
實驗開始前，需要將標準品溶解為按照說明書要求的濃度，再按照不同濃度稀釋上樣時使用。
→ 取出標準品，開蓋前短暫離心（如：1000 rpm離心1min），將運輸與存儲過程中沾到管壁、管蓋上的標準品落入管底。
→ 根據(jù)說明書要求加入一定體積的指定稀釋液，室溫靜置溶解15 min，待其充分溶解后，輕輕吹打讓其充分混勻。
→ 根據(jù)標準曲線推薦濃度進行稀釋。
1. 準備6個干凈的EP管，提前做好不同濃度標識（如S1-S6）。
2. 梯度稀釋：根據(jù)說明書，每管加入等體積的標準品稀釋液。吸取同體積溶解好的標準品至下一個濃度的S1管中，吹打10次混勻；從S1管中吸取同體積溶液到下一個濃度的 S2管中，吹打10次混勻。同法稀釋至其他濃度。
注意：梯度稀釋標準品時，稀釋后可進行短暫的離心，讓沾到EP管蓋與管壁的液體落入管底，并由此進行下一個濃度的稀釋。
以500 ul/管為例，用標準品&標本通用稀釋液將復(fù)溶后的標準品母液進行倍比稀釋，示意稀釋方法如下圖，也可根據(jù)實際用量來調(diào)整稀釋體積，如200 ul/管。
3. 空白對照：標準品稀釋液作為空白對照，即0濃度。
圖1：標準曲線2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/ml的稀釋示例圖，具體稀釋濃度請以ELISA試劑盒隨貨說明書為準。
→ 復(fù)溶后的標準品原液，若有未使用完畢的，建議廢棄。
