ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌步驟通常在每次抗體或抗原孵育后進(jìn)行，通過洗滌步驟以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中可能非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。
因此，優(yōu)化ELISA操作步驟的重點(diǎn)之一在于洗滌，不充分的、操作失誤的洗滌將導(dǎo)致較差的重復(fù)性、交叉污染或高背景。一次常規(guī)的ELISA實(shí)驗(yàn)過程中，一般包含兩個(gè)或以上的孵育步驟，中間以洗滌步驟隔開，可能需要2-3次的洗滌。如何進(jìn)行洗板，又優(yōu)化洗板步驟，從而使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加精準(zhǔn)可靠呢？
常見的洗板法分為手工洗板法與自動(dòng)洗板機(jī)法，二者沒有絕對(duì)的優(yōu)劣區(qū)分，只要相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員操作嚴(yán)謹(jǐn)、步驟合乎要求，均能得到可靠的數(shù)據(jù)結(jié)果。
→自動(dòng)洗板機(jī)
自動(dòng)洗板機(jī)速度快，引入的人為因素少，速度快，條件恒定，是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用的洗板方法，但是由于洗板機(jī)的特點(diǎn)，每次洗板后不能拍干，故會(huì)有較多的液體殘留，需通過增加洗板次數(shù)來減少這種誤差。
洗滌參數(shù)與洗滌次數(shù)：影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。洗滌次數(shù)越多，背景越低，但太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測定。對(duì)于商業(yè)化ELISA試劑盒，洗板的次數(shù)在試劑盒研發(fā)測試階段已經(jīng)進(jìn)行了測試，可根據(jù)隨貨說明書的建議設(shè)置洗板機(jī)的洗滌參數(shù)。
抽吸：抽吸的參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景（殘留量）和差異。因此，洗板后需要手動(dòng)拍去酶標(biāo)板中殘留液體。
以欣博盛ELISA試劑盒為例，要求注入的洗滌液為350 ul，注入與吸出間隔30－60秒，洗板5-6次（以隨貨說明書要求為準(zhǔn)）。
→手工洗板
沒有自動(dòng)洗板機(jī)的情況下，可手動(dòng)洗滌酶標(biāo)板。
以欣博盛ELISA試劑盒為例，要求甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350 ul，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。
手工洗板小貼士：
戴好手套、穿好防護(hù)服，注意實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔到位。
懸空加入洗液，洗滌全程不要觸碰到實(shí)驗(yàn)孔。
如果無法保證傾倒洗滌液時(shí)不發(fā)生串孔現(xiàn)象，盡量選擇用移液器將洗滌液單獨(dú)吸出。
為防止孔間污染，每一次拍板前，吸水紙都要更換。
ELISA實(shí)驗(yàn)步驟每一步看起來很簡單，但是在實(shí)際操作過程中，還是應(yīng)該仔細(xì)操作每一個(gè)步驟，包括常被忽視的洗滌步驟，才能獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。
