在進(jìn)行ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）實(shí)驗(yàn)時(shí)，當(dāng)做完實(shí)驗(yàn)讀板時(shí)樣本的吸光值（OD值）極低，甚至出現(xiàn)低于空白孔的情況，這一結(jié)果可能是由多種原因造成的。
樣本吸光值極低，關(guān)鍵在于判斷是操作問(wèn)題、ELISA試劑盒的問(wèn)題還是樣本本身的問(wèn)題。欣博盛生物為您總結(jié)了以下常見(jiàn)的可能原因：
1. 試劑添加遺漏
在操作中漏加生物素化抗體、酶結(jié)合物、底物等組分，導(dǎo)致讀數(shù)時(shí)沒(méi)有讀值。
對(duì)照說(shuō)明書(shū)檢查實(shí)驗(yàn)步驟，確認(rèn)所有試劑都已按照說(shuō)明書(shū)的要求添加。
2. 試劑盒組分未充分回溫
ELISA試劑盒中的組分需要在室溫下完全解凍和回溫才能使用。因此，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，需要取出試劑盒平衡至室溫后，再開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
3. 孵育溫度太低
抗體在適宜的溫度下有最佳的結(jié)合活性，確保孵育時(shí)在正確的溫度下進(jìn)行，孵育箱要設(shè)定好適宜的溫度并正常工作。
4. 底物不足或變質(zhì)
底物是產(chǎn)生顏色反應(yīng)的關(guān)鍵成分，如果底物不足或已變質(zhì)，則不會(huì)有顏色變化。
確保在實(shí)驗(yàn)中使用了足量的新鮮配制底物溶液。確保儲(chǔ)備液在有效期內(nèi)并且正確保存，確保試劑按正確的濃度使用。
5. 酶標(biāo)板包被、封閉問(wèn)題
出現(xiàn)吸光值（OD值）極低的情況，提示包被原（抗體或抗原）可能未正確固定在微孔板上，或封閉步驟不當(dāng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合，影響結(jié)果。
如酶標(biāo)板由實(shí)驗(yàn)人員自行包被與封閉，需檢查確認(rèn)包被原的濃度和包被過(guò)程是否正確、封閉液是否合適，封閉時(shí)間是否足夠。如酶標(biāo)板為ELISA試劑盒生產(chǎn)商預(yù)包被，可聯(lián)系廠家進(jìn)行售后。
6. 一抗或二抗失效
出現(xiàn)吸光值（OD值）極低的情況，提示抗體可能已經(jīng)失去活性，無(wú)法結(jié)合目標(biāo)分子。此時(shí)可能需要更換新的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
7. 樣本問(wèn)題
（1）樣本中可能不含目標(biāo)抗原或抗體，或者濃度低于檢測(cè)限。
檢查靶蛋白表達(dá)系統(tǒng)，確保它在您的樣品中被表達(dá)出來(lái)。如果靶蛋白的表達(dá)水平低，需要嘗試濃縮樣本，或選擇一個(gè)更加靈敏的檢測(cè)方法。確保您使用的是沒(méi)有超過(guò)測(cè)定方法檢測(cè)范圍的陽(yáng)性對(duì)照。
（2）樣本凍融后蛋白降解、凝集，分布不均。
樣本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，如需低溫下長(zhǎng)期保存，需做好分裝。使用和保存中避免樣本反復(fù)凍融。
（3）樣本可能不適用于ELISA檢測(cè)方法研究。
樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做 ELISA 檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)條件，實(shí)驗(yàn)前，需要確定試劑盒能夠用于樣本的檢測(cè)。
8. 儀器問(wèn)題：
酶標(biāo)儀可能需要校準(zhǔn)或清潔，或?yàn)V光片設(shè)置錯(cuò)誤。
此時(shí)需校準(zhǔn)酶標(biāo)儀，清潔光學(xué)部件，檢查濾光片設(shè)置。
當(dāng)遇到ELISA實(shí)驗(yàn)沒(méi)有讀值的情況時(shí)，首先應(yīng)檢查實(shí)驗(yàn)操作是否嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，然后逐項(xiàng)排查上述可能的原因。如果問(wèn)題依然存在，可能需要重新準(zhǔn)備試劑重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在排除所有可能的操作原因后，如果問(wèn)題仍然沒(méi)有解決，可能需要聯(lián)系試劑盒的供應(yīng)商尋求進(jìn)一步的技術(shù)支持。
關(guān)于欣博盛生物：
欣博盛生物科技有限公司成立于2007年，是一家力耕于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè)，專(zhuān)門(mén)從事以ELISA產(chǎn)品為主的生物試劑研發(fā)與銷(xiāo)售，致力于為廣大研究人員提供高品質(zhì)的科研產(chǎn)品。
欣博盛研發(fā)生產(chǎn)中心擁有完整的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒研發(fā)和生產(chǎn)平臺(tái)，研發(fā)生產(chǎn)團(tuán)隊(duì)由具有近30年免疫檢測(cè)行業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專(zhuān)家?guī)ьI(lǐng)，由具有生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、檢驗(yàn)學(xué)等相關(guān)專(zhuān)業(yè)和研發(fā)經(jīng)驗(yàn)的人員組成。廣泛與歐美知名的抗原抗體生產(chǎn)公司和機(jī)構(gòu)開(kāi)展合作，篩選和委托定制高質(zhì)量的原料，采用行業(yè)內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)來(lái)研發(fā)生產(chǎn)ELISA試劑盒。公司自主研發(fā)的ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員的好評(píng)。欣博盛品牌 ELISA試劑盒自推出以來(lái)已先后在Nature, Cell, PNAS等國(guó)際期刊中被引用。
欣博盛生物現(xiàn)可提供三百余種不同指標(biāo)ELISA試劑盒，涵蓋各類(lèi)常用指標(biāo)，更可提供ELISA定制與代測(cè)服務(wù)。更多詳情，歡迎咨詢(xún)欣博盛生物！
